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WB、ELISA的这些关键点,你有没有忽略过?

发布时间2019-10-08        浏览次数:139

许多童鞋都经历过做了很多次 western-blot、ELISA,却还是得不出好结果。其实实验方法虽然成熟,但是操作的时候一不留神,结果就可能毁于一旦。看看你有没有忽略过以下这些点?

 

一、ELISA

1、样本尽量避免反复冻融。

2、有时结果异常的未解之谜可能就是上错样本了。

3、特异性强:一抗和二抗zui好来源非同一物种,这样在加入三抗后显色更明显。

4、选择蛋白纯度高,免疫量强抗体很重要。

因此选择靠谱的试剂盒很重要,对照说明书操作起来也方便。其中上样手法、洗板力度对实验结果影响都很大,可以将实验交给更有经验的人操作。

 

二、western-blot

1、在细胞收集、总蛋白提取整个操作都要尽量在冰上进行。提前开离心机预冷。

2、电泳用自来水冲洗干净后,要再用蒸馏水冲洗,晾干。

3、灌胶前玻板一定要对齐夹紧。曾有过整个下午都在漏胶花胶的惨痛经历。

4、转膜前,膜事先用甲醇激活,转膜时zui好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。

5、孵育的时候不要好几张膜叠在一起摩擦摩擦,这对结果也会有影响。

6、用胶片曝光的时候一定要快进快出,胶片可事先折个小角。胶片容易刮花,接触的时候要特别小心,万一划伤了目标条带真是心痛到说不出话。

但是用胶片曝光的时间难以捉摸,而且时间过久还可能产生误差,做一次 WB 超级贵,抗体都舍不得多用,真的错不起。化学发光成像仪就可以解决这个问题,核酸检测、蛋白检测都可搞定。

 





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